尊龙凯时大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：第一次建议1:2传代；传代后每2天更换培养基。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，并留作对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞收到后，待培养至良好状态后，灌满完全培养液并密封瓶口以保证运输安全。处理步骤如下：

1. 用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内保持无菌操作。

2. 将细胞瓶放入37°C、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。

3. 显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保留（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要售后依据，若不提供照片，则默认收到状态良好。

4. 传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的培养基，便于进行对比培养。换液后，请将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请收集瓶内培养液至离心管，留5ml完全培养基于37°C、5% CO2中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若大部分细胞变圆并脱落，迅速在操作台轻拍培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使之脱落，然后转移至15ml离心管中，在1000 RPM离心下沉5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80°C冰箱中。如需转入液氮罐，需先在-80°C保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护设备），迅速放入37°C水浴中解冻，待冻存管内无结晶时，擦拭外壁以消毒。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，轻轻重悬于5ml完全培养基内，接种至T25培养瓶，并放入37°C、5% CO2培养箱继续培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中脱落，这是正常现象。如脱落较多，请按照以下方法处理：

收集培养瓶内所有培养液至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清以进行后期对比培养。添加胰蛋白酶1-2ml进行轻轻消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，再次离心、弃上清、重悬后，按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37°C、5% CO2培养箱继续培养。

五、售后条款

1）如细胞出现问题，可能的重发情况包括：

1. 运输过程中细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等，均可重发。
2. 细胞污染问题，须在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货的细胞，静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时内如大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），均可重发。
4. 若干冰运输的细胞复苏24小时后或常温运输的细胞静置4小时却未开封出现污染，支持重发。
5. 有关细胞活性的问题，请在收到7天内报告，使用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后提供重发。
6. 接收细胞当天及2-3天内请拍照，三天未告知视为产品合格。如在4-7天内出现问题，同时提供前3天照片和问题发生时的照片，以及操作步骤信息，将由技术人员判断，若责任在我方则重发；若双方责任，需协商处理或按合同价50%收费重发。

2）以下情况不予重发：

1. 由客户导致的细胞污染，不予重发。
2. 因客户不正确操作导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 使用非推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发。
4. 未提供细胞培养前3天的照片，不予重发。
5. 细胞培养过程中经过其它处理的，不予重发。
6. 收到后2天内未告知，亦不予重发。
7. 具体情况将视情况而定。

请遵循上述指导，以确保最佳实验结果与细胞保存，选择尊龙凯时，为您的研究提供优质保障。