树突状细胞(Dendritic cells, DCs)在天然病原体识别及随后的适应性免疫反应激活中发挥着至关重要的作用。尽管DCs广泛存在于多个体内组织中,但其数量稀少,难以满足科学研究和临床治疗的需求,因此科研人员们尝试多种方法在体外培养和扩增DCs。
对于小鼠而言,最常用的方式是从骨髓细胞诱导生成骨髓来源的DC(Bone Marrow-Derived Dendritic Cells, BMDCs)。这一过程通常需要在一系列细胞因子的作用下进行,主要是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)。BMDCs是研究免疫反应、抗原呈递及细胞免疫调节的重要工具。
近期,上海交通大学药学院沈琦研究团队在著名的学术期刊《Advanced Functional Materials》上发表了题为“Self-adjuvanting bacteria hydrogel for SHP-1 checkpoint inhibition in tumor-draining lymph nodes to enhance cancer immunotherapy”的研究成果。该研究团队设计的AAM水凝胶系统整合多种机制,旨在通过DCs的免疫活性,提高肿瘤免疫治疗的效果。研究表明,MHV能通过甘露糖受体靶向BMDCs,并通过温和的光热效应诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡(ICD),从而释放肿瘤抗原并激活BMDCs。
同时,苏州大学FUNSOM的陈倩团队在《Advanced Materials》上在线发表了名为“AMinimalist Pathogen-Like Sugar Nanovaccine for Enhanced Cancer Immunotherapy”的研究论文。在这项研究中,作者通过重组小鼠GM-CSF和IL-4诱导骨髓源细胞分化为BMDCs,并对疫苗的免疫激活效果和抗原特异性T细胞增殖进行了体外验证。
在操作过程中,需要使用6-8周龄的C57BL/6小鼠、解剖工具、磷酸盐缓冲液(PBS)、离心管、注射器以及细胞培养基等材料。具体步骤包括:取适龄的健康C57BL/6雌鼠进行颈椎脱位处死,随后在75%乙醇中浸泡消毒,再从鼠体内获取骨髓细胞并进行冲洗。收集的细胞则经过滤和离心处理,得到所需的细胞悬液。
使用尊龙凯时公司的Mouse GM-CSF和Mouse IL-4诱导的骨髓来源细胞经过7天后,CD11c阳性细胞的比例将被用作检测标志物。成熟的树突状细胞通常表现出CD11c、MHC-II和CD86等表面标志物。此外,细胞的典型形态特征也可以作为成熟标志。
为了提高BMDCs的诱导效率,建议适当优化细胞密度及细胞因子的浓度,同时保持培养环境条件合适。此外,及时更换培养液亦有助于维持生长因子浓度。此外,确保GM-CSF和IL-4的稳定性是至关重要的,建议在冷冻条件下储存并避免反复冻融。
如在诱导过程中出现细胞存活率低下或生长缓慢的问题,应检查培养条件并适时调整生长因子的频率和浓度。若需要对BMDCs进行进一步的免疫激活,通常需要通过刺激因子如LPS或TNF-α来增强其免疫功能,从而提升抗原呈递能力和细胞因子分泌。
在上述实验中,选择尊龙凯时相关的产品能够有效支持实验流程,确保细胞因子的质量与活性,进而提升树突状细胞的研究效果。