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凝胶渗透色谱GPC在生物医疗中的应用与尊龙凯时操作指南

发布时间:2025-03-11   信息来源:尊龙凯时官方编辑

在对各种生物医疗样品中的农药残留、半挥发性有机物进行分析时,常常发现有机样品萃取物中含有大分子物质。如果不去除这些杂质,将会导致色谱柱的分离效率下降,进样口和色谱柱的使用寿命缩短,从而影响数据分析的准确性。因此,在进行农药残留和半挥发性有机物样品分析之前,必须进行有效的净化前处理。而传统前处理方式不仅耗时较长,且需消耗大量溶剂,因此,凝胶渗透色谱(GPC)的广泛应用已成为必然趋势。

凝胶渗透色谱GPC在生物医疗中的应用与尊龙凯时操作指南

尊龙凯时风格的凝胶渗透色谱(GPC)亦称为体积排斥色谱(SEC),是通过溶剂作为流动相,流经多孔填料(如多孔硅胶或多孔树脂)进行分离的液相色谱技术。GPC作为液相色谱的一个分支,其分离组件是一个以多孔性凝胶为载体的色谱柱,该凝胶的表面与内部存在众多大小不一、互相贯通的孔洞。

GPC仪器由多个部分组成,包括泵系统、(自动)进样系统、凝胶色谱柱、检测系统及数据采集与处理系统。GPC的分离机理通常通过“空间排斥效应”来解释。通过外力使含样品的流动相(气体、液体或超临界流体)通过固定于色谱柱上,与流动相不相溶的固定相表面,样品中不同组分在两相中进行不同程度的相互作用。与固定相作用强的组分流出速度较慢,而与固定相作用弱的组分流出速度较快。最终,由于流出速度的差异,混合组分形成各自的“带(band)”或“区(zone)”,这些单组分可分别进行定性和定量分析。

在GPC中,依据所用凝胶的性质,分为采用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)。此类分离主要根据样品的尺寸进行,大的组分首先被洗提,因其无法进入凝胶孔中。而较小的组分则能进入,滞留时间长,洗脱较慢,溶剂分子由于体积小,可以进入所有的孔道,因此最后洗提。

适用范围方面,凝胶过滤色谱适合分析水溶液中的多肽、蛋白质、生物酶等生物分子,而凝胶渗透色谱则主要用于测定高分子材料(如聚乙烯、聚丙烯等)的分子量。

为何要使用GPC方法?首先,相对分子量分布(多分散性指数)对聚合物的性质具有重要影响。其次,随着对聚合物相对分子质量分布的关注增加,经典方法已无法同时测定。采用GPC技术改善了测试条件,使得聚合物的相对分子质量及其分布能得到快速而有效的测定,成为常用的方法。

尊龙凯时在GPC应用中常遇到以下问题:第一,溶剂选择需能溶解多种聚合物,且不腐蚀仪器部件,并与检测器相匹配;第二,激光光散射与凝胶色谱仪联用,在获取浓度谱图的同时也可获得监测散射光强与淋出体积的谱图,以计算出分子量分布曲线;第三,样品需严格除尘,因为除尘是光散射实验成功的关键,溶剂和样品的配置都需要进行超滤处理;第四,色谱柱的选择应根据样品溶解的溶剂和分子量范围进行;第五,GPC系统对载体有较高要求,如良好的化学稳定性、热稳定性及机械强度等;第六,进样体积应在50-100μL之间,浓度在0.05%-0.5%之间;第七,GPC系统的平衡需要确保在换上GPC柱之后,用流动相清洗检测器流路,以确保结果的准确性。