尊龙凯时的感染预实验主要以24孔培养板为例，旨在同时进行目的细胞与工具细胞的感染试验。工具细胞可选择293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）或其他类型细胞。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪、枪头、EP管、细胞计数板、冰盒以及废液缸等。此外，依据目的细胞的特性，可以酌情添加Polybrene。

Day 1: 准备细胞

首先，将细胞培养至对数生长期。利用胰酶对细胞进行消化并计数，测定细胞密度后，每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500µL的细胞培养液。通常情况下，H1299或293T细胞在感染后第3天可达到80%-90%的融合度（可根据目的细胞的实际生长速度调整接种量，以确保第3天达到预期的融合度）。

Day 2: 准备和感染目的细胞

在这一天的实验流程中，首先计算所需的慢病毒颗粒量，并从-80℃的冰箱中取出冻存的慢病毒颗粒，进行冰浴融化。然后，从培养箱中取出细胞，观察其生长状态及融合度，若细胞状态良好，便可开始具体实验步骤：

• A. 小心吸去24孔培养板中的旧培养液，并加入新的完全培养液。
• B. 将计算好的慢病毒颗粒液分别加入细胞中，保持培养板平置，以划8字的方式轻柔混匀。
• C. 混匀后，将细胞培养板放入37℃、5% CO₂培养箱，过夜培养。

Day 3: 更换培养液

在感染后12-16小时，吸出含慢病毒颗粒的培养液，随后重新向培养板添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，继续培养（请注意，根据目的细胞的特性，调整感染时长，某些细胞不适宜感染超过12小时）。

Day 4: 继续观察细胞状态

在这一阶段，继续培养细胞，并仔细观察细胞状态是否有异常变化。

Day 5: 评估慢病毒颗粒感染效率

最后，使用70%乙醇对培养板外壁进行清洁，并在倒置荧光显微镜下观察细胞的荧光表达，拍照记录并评估慢病毒颗粒的感染效率。如慢病毒颗粒携带的基因表达所需时间较长，建议在感染后72、96小时进行荧光观察。根据观察到的荧光情况，可以从MOI梯度尝试中初步确定目的细胞的MOI值。

通过以上步骤，您可以有效地评估和优化目的细胞的感染过程，为< strong>尊龙凯时的相关研究提供有力支持和数据支持。