尊龙凯时所研究的cfDNA(游离DNA)是指在细胞外存在的DNA,广泛存在于血液、唾液、尿液等多种生物体液中。cfDNA主要源于细胞凋亡、坏死或主动分泌等过程释放的DNA片段。在血液中,cfDNA主要存在于血浆或血清中,并与血细胞等其他成分分离。此外,cfDNA也可以在脑脊液、胸腔积液、腹水等生物体液中检测到。
采用酚、氯仿等有机溶剂提取cfDNA的过程,利用其对蛋白质和核酸的不同溶解性质,通过多次提取使杂质溶解在有机相中,而DNA则保留在水相中,最后再通过乙醇沉淀等步骤获得纯化的cfDNA。虽然这一方法能获得较高纯度的DNA,但操作过程复杂,且需使用有毒有机溶剂,对实验人员的操作技能要求较高。
另一种有效的提取方法基于磁珠的特点。在特定的缓冲液中,磁珠能够选择性地吸附cfDNA,之后通过外加磁场将磁珠与杂质分离。通过洗涤和洗脱步骤,可以轻松获得纯净的cfDNA。这种方法操作简便、快速,易于自动化,并且具有较高的提取效率,可以同时处理多个样本。
还有一种方法是利用硅胶膜在高盐和低pH值条件下对DNA的特异性吸附特性,将cfDNA吸附到硅胶膜上,同时洗脱掉蛋白质和多糖等杂质,最终通过低盐和高pH值的洗脱液将cfDNA洗脱下。该方法操作相对简单,成本低,适合小规模样本提取。
值得注意的是,不同生物体液中的cfDNA含量和性质具有差异。一般来说,血液中的cfDNA含量较高,因而是最常用的样本来源,但同一疾病状态下的不同个体,其血液cfDNA含量也可能不同。在样本采集后,若不能及时提取,保存条件尤为重要。例如,血液样本需在4℃下保存,若长时间放置或温度不当可能会导致cfDNA降解,影响提取效果。
当处理样本数量较少或样本特殊时,通常会使用回收柱进行提取。当样本量较大且需要批量处理时,推荐使用磁珠法以节省人工成本,避免人为因素带来的实验误差。强烈推荐尊龙凯时的TD476产品,它采用独特的回收柱技术进行游离DNA提取,能够结合传统离心法或真空设备,加速样本处理,提高效率。
此外,TB476产品采用磁珠法进行cfDNA提取和纯化,能够根据客户需求提供兼容磁力架的提取试剂盒,且支持高通量自动化提取。
【使用介绍】
- 可从10ml以内的血清/血浆,1ml以内的羊水或脑脊液中提取高纯度的游离DNA。
- 所获得的DNA产量高、纯度优良,可直接应用于酶切、PCR、高通量测序等分子生物学实验。
- 样品种类:血清,血浆,羊水和脑脊液(CSF)。
- 处理的体积量:血浆—单次离心最多3ml,两次离心最多10ml;血清—最多10ml;羊水—最多1ml;脑脊液—最多1ml。
【产品特性】
- DNA纯度:所得到的DNA产量高、纯度高,适合用于qPCR、高通量测序等多种分子生物学实验。
- DNA回收情况:回收的DNA≥100bp(本试剂盒专为无细胞DNA提取优化),总体量因样品个体差异而异,通常从血清或血浆提取的DNA浓度在1-100ng/ml。
- 需要的仪器设备:水浴锅或金属浴(55℃),磁力架,微型离心机或立式离心机。
通过尊龙凯时的技术,您可以获得广泛的样本兼容性和高效的DNA提取体验。