尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP使用指南

一、细胞培养条件

细胞培养应在严格的无菌条件下进行。推荐使用37℃、5% CO2的环境以确保细胞的最佳生长状态。

二、细胞接收与处理

接收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后放置于超净工作台中进行无菌处理。建议将细胞瓶静置于37℃、5% CO2培养箱中3-4小时，以便细胞稳定。显微镜下观察细胞生长情况并记录不同倍数的图片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为售后依据，未提供照片则默认细胞状态良好。此外，传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，便于对比观察，换液时请将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基放于37℃、5% CO2培养箱中。如果细胞密度超出80%，可进行传代，具体步骤如下：1. 去除培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。 2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。细胞呈圆形并开始脱落后，迅速将瓶拿回轻敲瓶底，并加入5ml以上完全培养基以终止消化。 3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。 4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%区域时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。 2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，毒化观察至细胞回缩变圆，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。 3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后转入冻存管中。 4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需后期转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，确保冻存管中无结晶后用75%酒精擦拭外壁。 2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。 3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，并放在37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。 4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打并消化1-2分钟后，再加入5ml完全培养基终止反应。随后离心，弃去上清，重悬细胞。最后按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，并放回37℃、5% CO2细胞培养箱中。

五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发条件及标准： 1. 在运输途中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等问题，支持重发。 2. 若出现细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，可核实后重发。 3. 常温运输的细胞在静置24小时后、干冰运输的细胞复苏后24小时内，若细胞存活率低于预期，需要提供真实且清晰的细胞状态照片，方可重发。 4. 若干冰冻存发出的细胞在复苏后24小时或常温运输的细胞在静置4小时前未开封而出现污染，支持重发。 5. 如出现细胞活性问题，请在收到产品7天内提供实验结果，并用台盼蓝染色法验证细胞活力，核实后可重发。 6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，未及时反馈将视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供接收到细胞前3天的照片、问题出现时的照片及详细操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判断是否重发。 2）不支持重发的情况： 1. 客户自身造成的细胞污染。 2. 客户不当操作导致细胞状态不佳。 3. 使用非本库推荐的细胞培养体系。 4. 未提供细胞培养前3天的照片。 5. 样本在培养时经其他处理的情况。 6. 在收到2天内未通知的情况。 7. 具体情况视而定。